本發(fā)明涉及生物化學和檢驗與檢測領域，具體涉及黃色熒光蛋白標記的Annexin A5及其制備方法和在制備凋亡檢測試劑中的應用。本發(fā)明以pET28a?Annexin A5?EGFP?his重組質粒為模板，構建了重組質粒pET28a?Annexin A5?Citrine?his、pET28a?Annexin A5?Venus?his、pET28a?Annexin A5?Ypet?his。大量表達Annexin A5?Citrine、Annexin A5?Venus和Annexin A5?Ypet融合蛋白，通過Ni柱親和層析純化獲得了這三種蛋白，純度約為90％。流式細胞儀檢測結果顯示：Annexin A5?Citrine、Annexin A5?Venus和Annexin A5?Ypet融合蛋白均可以識別和標記凋亡細胞，它們與凋亡細胞的親和力分別是3113nmol/L，444.3nmol/L和391.6nmol/L。以上結果顯示Annexin A5?Citrine、Annexin A5?Venus和Annexin A5?Ypet融合蛋白均可以用于凋亡細胞的識別和標記。