一種真菌菌絲氮硫自摻雜碳點的制備方法及應用，屬于熒光碳納米材料的研究領域。制備步驟如下：(1)首先利用生物合成技術制備真菌菌絲，先將菌絲在PDA固體培養(yǎng)基中恒溫培養(yǎng)，然后將菌絲接種于改性PDA液體培養(yǎng)基中，于恒溫振蕩器中培養(yǎng)，最后對菌絲進行純化；(2)以上述菌絲為原料，在水熱條件下一步合成氮硫自摻雜碳點(N,S?CDs)。本發(fā)明首次采用生物合成與水熱相結合的方法，制備了性能優(yōu)異的N,S?CDs。N,S?CDs可對四環(huán)素類抗生素(TCs)進行高選擇性、高靈敏性檢測，當TC濃度在0.5～38.46μM時，線性相關系數(shù)為0.991，對TC檢出限為0.041μM。利用該N,S?CDs制備熒光檢測試紙可對養(yǎng)殖廢水中的TCs進行快速檢測。而N,S?CDs不會影響細胞的存活率，使其在細胞成像領域具有很大的應用潛力。