本發(fā)明涉及一種金黃霉素A和金黃霉素B的分離純化方法?，F(xiàn)有方法中有機溶劑回收條件要求高，上樣量小，收率低，成本高。本發(fā)明的技術方案如下：[1]將金黃霉素A、B發(fā)酵液板框過濾，得到濕菌渣。[2]用有機溶劑萃取濕菌渣，過濾得到提取液。[3]將提取液真空濃縮，加入非水溶性有機溶劑溶解。[4]靜止分層，收集非水溶性有機溶劑層。[5]加活性炭、無水硫酸鈉脫色后抽濾，濾液真空濃縮。[6]加有機溶劑溶解。[7]上制備色譜分離。本發(fā)明分離純化金黃霉素A、B的方法操作簡單，有機溶劑用量少，避免了因使用大孔樹脂、硅膠或有機溶劑結(jié)晶而產(chǎn)生大量廢水和有機溶劑。