本發(fā)明公開了一種組織工程心肌補(bǔ)片制備方法，其特征在于，包括如下步驟：S1、取成年豬心；S2、沖孔機(jī)打孔獲取左心室心肌塊；S3、心肌塊凍存于?80℃至少16小時(shí)；S4、解凍心肌塊，切取厚度為1cm心肌塊并用瓊脂糖包埋；S5、用陶瓷葉片振蕩切片機(jī)，切割心肌塊，獲得厚度約為300?500μm、直徑約為14mm的心肌組織薄片；S6、制備得到去細(xì)胞心肌組織薄片；S7、將hiPSC?CM體外定向誘導(dǎo)分化14?16日；S8、胰蛋白酶消化獲取細(xì)胞懸液，以2×107個(gè)細(xì)胞/cm2接種量，種植iPSC?CMs于S6制備的去細(xì)胞心肌組織薄片，繼續(xù)培養(yǎng)載hiPSC?CM組織工程心肌薄片1?28日得到組織工程心肌補(bǔ)片。該組織工程心肌補(bǔ)片制備方法，制備方法過程簡(jiǎn)單，可以穩(wěn)定高效的滿足對(duì)組織工程心肌補(bǔ)片的培養(yǎng)制備，滿足醫(yī)療使用要求。