本發(fā)明提供了一種應(yīng)用于核酸擴(kuò)增實時電化學(xué)pH檢測的反應(yīng)體系及檢測方法。所述反應(yīng)體系為恒溫擴(kuò)增反應(yīng)體系，含有引物、反應(yīng)液、DNA聚合酶、和待檢DNA；所述反應(yīng)體系中的反應(yīng)液含有TritonX-100、dNTP、甜菜堿、Mg2+、K+與NH4+，反應(yīng)體系的反應(yīng)液中有額外添加的OH-。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)，本發(fā)明是利用對pH敏感的電化學(xué)傳感器對核酸擴(kuò)增進(jìn)行實時檢測：對于陰性樣本，擴(kuò)增反應(yīng)過程中由于不產(chǎn)生質(zhì)子因此反應(yīng)前后pH無變化，而對于陽性樣本，隨擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，氫離子作為副產(chǎn)物不斷產(chǎn)生，因此反應(yīng)前后pH發(fā)生變化；該反應(yīng)液能夠替代普通核酸擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液，不僅能保證核酸擴(kuò)增正常進(jìn)行，且對擴(kuò)增過程中氫離子的產(chǎn)生足夠敏感，產(chǎn)生明顯的pH變化。