本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)5?羥甲基胞嘧啶脫氧核糖核苷酸的光電化學(xué)生物傳感器及其制備方法，所述光電化學(xué)生物傳感器，包括：電極，依次修飾在電極表面的依次修飾在電極表面的硫化鎢、聚多巴胺、巰基苯硼酸、5hmC、phos?tag?biotin和鏈霉親和素。本發(fā)明利用硫化鎢良好的光電活性和生物兼容性，聚多巴胺優(yōu)良的電子供體性質(zhì)和生物兼容性，phos?tag?biotin對(duì)磷酸基團(tuán)的特異識(shí)別和結(jié)合性能，以及M.HhaI甲基轉(zhuǎn)移酶催化的5hmC上羥甲基與巰基的特異反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)5hmC的高靈敏性和高特異性檢測(cè)。本發(fā)明方法可很好的消除5mC對(duì)5hmC檢測(cè)的干擾。本發(fā)明的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，實(shí)現(xiàn)了儀器小型化，且易于操作，僅對(duì)電極表面進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)5hmC的檢測(cè)。