本發(fā)明屬于提取及其分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種甾體固醇類物質(zhì)來(lái)源性檢測(cè)方法及其應(yīng)用，所述甾體固醇類物質(zhì)來(lái)源性檢測(cè)方法，包括：提取樣品中甾體固醇類物質(zhì)后進(jìn)行GC?C?IRMS檢測(cè)分析δ13C值。本發(fā)明開(kāi)發(fā)的GC?C?IRMS檢測(cè)方法的檢測(cè)濃度線性范圍為10～13000ng/mL，在取用3mL尿樣時(shí)，對(duì)尿樣中含量較低的T、5α?diol的最低檢測(cè)濃度為10ng/mL，對(duì)尿樣中濃度較高的An和Etio的最低檢測(cè)濃度為100ng/mL。本發(fā)明所述檢測(cè)過(guò)程只需一次液相分離，無(wú)需衍生化；質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程儀器線性良好，對(duì)各分析物進(jìn)行單獨(dú)的線性模型試驗(yàn)測(cè)試，得到的不確定度結(jié)果符合最新WADA2021檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，分析時(shí)間短，效率高，符合大型賽事興奮劑檢測(cè)要求。