本發(fā)明涉及醫(yī)學檢測及生物傳感器技術領域，具體為基于截短型核酸適配體檢測黃體酮的工作電極及其制備方法和應用。所述制備方法包括：在電極上進行電沉積納米金修飾；將黃體酮核酸適配體自組裝在所述納米金修飾后的電極上。本發(fā)明方法制得的工作電極的應用包括使用方法，包括：S1：構建標準曲線和線性方程；S2：樣品檢測，收集電化學信號，計算黃體酮濃度。本發(fā)明的基于高特異性的截短核酸適配體的工作電極，通過結合小型電化學檢測設備，快速準確且大批量的測定樣本血液中黃體酮含量，不需要專業(yè)操作人員，昂貴的試劑盒，短時間內進行大量樣本檢測，大大提高了臨床檢測效率，還可再生重復使用，節(jié)約了成本。