一種半滑舌鰨來源的外泌體夾心ELISA檢測方法及試劑盒，本發(fā)明屬于魚類生物技術領域，特別是海水魚精液外泌體標志物應用領域。本發(fā)明利用抗CD63抗體作為捕獲抗體、抗HSP90抗體作為檢測抗體(酶標記抗體)，開發(fā)了針對半滑舌鰨精液來源的外泌體檢測的雙抗體夾心ELISA方法，并提供了一種可供鑒定及定量的試劑盒，用以鑒定半滑舌鰨精液中外泌體的標志蛋白，對于魚類的其他體液來源的樣本外泌體，以及其他標志蛋白鑒定具有重要的借鑒意義。本發(fā)明的方法特異性強，效率高且操作簡單方便，且無需大型儀器設備及昂貴的化學試劑，具有推廣價值。