本發(fā)明屬生物化學(xué)領(lǐng)域,涉及新的測量細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的方法,包括:用甲硫氨酸類似物將細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì)的甲硫氨酸標(biāo)記上疊氮小分子基團(tuán);在不同的時間點(diǎn)裂解細(xì)胞,通過SPAAC反應(yīng)將特定的可被識別的分子偶聯(lián)在蛋白質(zhì)的疊氮小分子基團(tuán)上;利用免疫沉淀法將所述可被識別的分子偶聯(lián)的蛋白質(zhì)沉淀:用均相時間分辨熒光共振原理對免疫沉淀前后樣品溶液中目標(biāo)蛋白定量,用差減法得出被標(biāo)記的目標(biāo)蛋白占總目標(biāo)蛋白的比例,從而確定目標(biāo)蛋白的降解速率。該方法可進(jìn)行非同位素依賴的,不依賴蛋白標(biāo)簽的,針對內(nèi)源性蛋白并與高通量篩選兼容的蛋白質(zhì)降解測量。可用于篩選疾病蛋白降解相關(guān)藥物等。
聲明:
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