本發(fā)明涉及一種用于檢測過氧化氫(H₂O₂)的熒光探針的制備方法和應(yīng)用，屬于化學(xué)分析檢測技術(shù)領(lǐng)域。其分子結(jié)構(gòu)如下：該探針分子最大發(fā)射波長在666nm，探針分子與過氧化氫(H₂O₂)作用后，熒光光譜藍(lán)移至594nm處，實現(xiàn)了比值紅光檢測過氧化氫(H₂O₂)，提高檢測的靈敏度；發(fā)射波長在紅光區(qū)能夠減少探針檢測過程中的背景熒光和活細(xì)胞的光損傷，增強(qiáng)生物對組織的穿透能力。本發(fā)明所述的探針分子在一定時間與濃度范圍具有良好線性，對過氧化氫(H₂O₂)識別能力強(qiáng)，選擇性好、抗干擾能力強(qiáng)，能夠準(zhǔn)確定位線粒體，實現(xiàn)線粒體內(nèi)檢測過氧化氫，該類探針在生物化學(xué)等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值。