本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了一種鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑高通量篩選方法，包括以下步驟：(1)鈣激活中性蛋白酶-1抑制劑篩選模型的建立與優(yōu)化：通過實(shí)驗(yàn)確定鈣激活中性蛋白酶-1最適反應(yīng)濃度；(2)陽性藥驗(yàn)證模型可靠性：配制不同濃度的陽性藥，每孔加入5ul；配制2×底物試劑，加樣前加入一定量的Cac12，每孔加入10ul；配制一定量最佳濃度的蛋白酶，每孔加入5ul；室溫反應(yīng)20分鐘后檢測(cè)化學(xué)發(fā)光，得到不同濃度陽性藥所對(duì)應(yīng)的抑制率，使用作圖軟件求算半數(shù)抑制率IC50。本方法使用Suc-LLVY-aminoluciferin化學(xué)發(fā)光Calpain-1底物，在緩沖體系中對(duì)Calpain-1和熒光素酶活性進(jìn)行優(yōu)化。加入Calpin-Glo試劑后Calpain-1剪切底物，產(chǎn)生輝光型化學(xué)發(fā)光信號(hào)。在這個(gè)均相的酶聯(lián)反應(yīng)體系中，化學(xué)發(fā)光信號(hào)值與酶的活性成比例變化。該方法簡(jiǎn)便快捷；化學(xué)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)，靈敏度高；分析結(jié)果穩(wěn)定可靠，重現(xiàn)性好。