本發(fā)明屬基因工程技術(shù)領(lǐng)域,具體地說(shuō)是乳腺癌細(xì)胞C35基因siRNA序列的設(shè)計(jì),表達(dá)載體的構(gòu)建及其在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。本發(fā)明根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則,分別選擇C35蛋白編碼區(qū)259nt-278nt,編碼區(qū)282nt-300nt的核苷酸序列,設(shè)計(jì)相應(yīng)的siRNA,用BLAST軟件進(jìn)行同源分析證實(shí)為C35高度保守序列后,化學(xué)合成單鏈寡核苷酸,體外經(jīng)退火形成雙鏈DNA,與真核表達(dá)載體pTZU6+1連接,酶切鑒定和序列測(cè)定分析表明成功構(gòu)建了兩種靶向C35基因序列的siRNA表達(dá)載體。上述表達(dá)載體通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞T47D后,采用RT-PCR和Western?Blot實(shí)驗(yàn)以及MTT、TUNEL利Annexin?V/PI流式細(xì)胞分析法實(shí)驗(yàn)均證實(shí)C35siRNA具有較強(qiáng)抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,可以在制備抗腫瘤的藥物中應(yīng)用。