本發(fā)明提供一種柔性熒光增強基底及其制備方法和應用，所述制備方法包括以下步驟：(1)將貴金屬膠體粒子集成在多孔金屬氧化物模板表面，得到貴金屬膠體粒子的陣列；(2)將步驟(1)得到的貴金屬膠體粒子陣列與柔性高分子復合，得到貴金屬膠體粒子陣列/柔性高分子的復合薄膜；(3)將步驟(2)得到的復合薄膜通過化學刻蝕，去除掉多孔金屬氧化物剩余的金屬得到所述柔性熒光增強基底。本發(fā)明通過對貴金屬膠體粒子的大規(guī)?？焖偌膳c柔性轉移，獲得了高效的柔性熒光增強基底。具有成本低，操作簡便，對熒光信號的增強效果優(yōu)良，為熒光光譜分析技術在實際中的廣泛應用打下了基礎。