本發(fā)明公開了一種制備增強型單體細菌熒光素酶luxAB的方法，先獲得目的基因；構(gòu)建重組表達載體；獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種；誘導靶蛋白的表達及蛋白的純化；檢測純化的增強型單體細菌熒光素酶的活性。本發(fā)明利用融合型熒光素酶其獨特的優(yōu)勢，將luxA和luxB基因異二聚體熒光素酶基因融合并經(jīng)過易錯PCR突變和化學隨機突變，篩選得到9個熒光強度增強的突變體，然后經(jīng)過shuffling技術(shù)，得到一個增強型單體細菌熒光素酶基因luxAB，將其克隆到表達載體pET28a上，轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)菌株中表達，并用溫和破碎法裂解細胞，純化表達產(chǎn)物，得到增強型單體細菌熒光素酶，本發(fā)明的方法過程簡單、生長周期短、成本低廉、易于純化、酶活性損失小，性能穩(wěn)定，具有重要的實際應用價值。