本發(fā)明涉及使用標(biāo)記的底物或底物類似物測定靶的改進(jìn)方法,所述方法包括在酶-催化的反應(yīng)中使所述底物或底物類似物進(jìn)行反應(yīng),僅當(dāng)?shù)孜锘虻孜镱愃莆锓磻?yīng)時(shí),產(chǎn)生帶有獨(dú)立地可測定信號(hào)的標(biāo)記部分。本發(fā)明特別公開了測定樣品中核酸的方法,所述方法基于使用末端-磷酸根-標(biāo)記的核苷酸作為核酸聚合酶的底物。本發(fā)明方法使用核苷多磷酸酯、二脫氧核苷多磷酸酯或脫氧核苷多磷酸酯類似物,它們具有連接于末端磷酸根上的生色染料、化學(xué)發(fā)光或熒光部分、質(zhì)量標(biāo)記或電化學(xué)標(biāo)記。當(dāng)核酸聚合酶使用這些類似物作為底物時(shí),酶-活化的標(biāo)記將存在于磷酰基轉(zhuǎn)移的無機(jī)多磷酸酯副產(chǎn)品中,磷?；D(zhuǎn)移的多磷酸酯產(chǎn)品通過磷酸酯酶的斷裂導(dǎo)致其上連接的標(biāo)記中的可測定變化,當(dāng)聚合酶試驗(yàn)在磷酸酯酶存在下進(jìn)行時(shí),提供了實(shí)時(shí)監(jiān)測RNA或DNA合成和測定靶核酸的方便的方法。