本發(fā)明公開(kāi)了一種釀酒酵母gsh1缺失突變株的構(gòu)建方法及應(yīng)用,步驟是:A、獲得Δgsh1突變株:釀酒酵母基因同源重組敲除原理、引物設(shè)計(jì)、敲除片段轉(zhuǎn)化方法按照文獻(xiàn)所描述的方法進(jìn)行(Yeast,1998,14:953-962),該方法是目前釀酒酵母中基因敲除的通用方法;依據(jù)釀酒酵母gsh1基因序列設(shè)計(jì)引物:上游引物P1和下游引物P2;利用上游引物P1和下游引物P2對(duì)質(zhì)粒pFA6a-Kan?MX6進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得含釀酒酵母gsh1基因上下游序列的敲除片段;通過(guò)醋酸鋰/PEG的轉(zhuǎn)化方法將敲除片段導(dǎo)入釀酒酵母BY47421菌株細(xì)胞,篩選得到釀酒酵母的Δgsh1突變株YJL101C。利用微生物遺傳學(xué)方法構(gòu)建釀酒酵母細(xì)胞Δgsh1突變株,再利用突變株進(jìn)行氯化鎘等重金屬細(xì)胞毒性的檢測(cè),以提高細(xì)胞毒性檢測(cè)靈敏度,方法易行,操作簡(jiǎn)便。
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