本發(fā)明提供了一種同時(shí)檢測(cè)血清中13種甾體激素的方法，包括：將待測(cè)血清樣品與內(nèi)標(biāo)溶液混合，通過液?液萃取得到檢測(cè)液，采用超高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)；液相色譜條件：流動(dòng)相A為0.1％甲酸水溶液，流動(dòng)相B為0.1％甲酸甲醇溶液；質(zhì)譜條件：正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的質(zhì)譜掃描模式；該13種甾體激素為孕烯醇酮、孕酮、17?羥孕烯醇酮、17α?羥孕酮，11α?羥孕酮、21?脫氧皮質(zhì)醇、11?脫氧皮質(zhì)酮、皮質(zhì)酮、氫化可的松、11?脫氧皮質(zhì)醇、可的松、醛固酮和雌酮。該方法同時(shí)檢測(cè)13種甾體激素的檢測(cè)時(shí)間僅6分鐘，操作簡(jiǎn)便，耗時(shí)少；靈敏度高，準(zhǔn)確性好，特異性強(qiáng)，檢測(cè)范圍廣，在醫(yī)療和生化檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用前景廣闊。