本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種三通道電化學(xué)發(fā)光傳感器及其在細(xì)胞檢測(cè)上的應(yīng)用，所述傳感器包括以聚苯胺為基底的工作電極、Ag/AgCl電極和電化學(xué)發(fā)光分析儀；其中，三支工作電極和三支Ag/AgCl電極分別插入三個(gè)獨(dú)立的電解池中，并以并聯(lián)的方式與電化學(xué)發(fā)光分析儀連接；其中，一支工作電極修飾魯米諾功能化的金納米顆粒，提供參比信號(hào)，同時(shí)對(duì)另外兩支工作電極上的細(xì)胞分別進(jìn)行Ru(bpy)₃²⁺和g?C₃N₄標(biāo)記，提供兩個(gè)檢測(cè)信號(hào)；最后，根據(jù)檢測(cè)信號(hào)和參比信號(hào)之間的比值對(duì)細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定；本發(fā)明在一次電位循環(huán)掃描過(guò)程中，獲得三個(gè)獨(dú)立的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)，同時(shí)提供了兩種檢測(cè)目標(biāo)細(xì)胞的方法。本發(fā)明的電致化學(xué)發(fā)光三通道設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，提高了檢測(cè)通量，操作簡(jiǎn)便，實(shí)用性強(qiáng)。