本發(fā)明公開(kāi)了一種基于原位還原的銀納米簇富集在含有胞嘧啶(C)的環(huán)型DNA序列作為信號(hào)探針以及采用雙重放大策略的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器檢測(cè)目標(biāo)凝血酶。本發(fā)明技術(shù)方案是設(shè)計(jì)識(shí)別發(fā)夾DNA且具有催化作用的DNA剪切酶，當(dāng)有目標(biāo)凝血酶時(shí)，打開(kāi)發(fā)夾DNA，在Zn2+作用下對(duì)底物DNA進(jìn)行剪切。再通過(guò)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(HCR)聚合大量的含有胞嘧啶(C)的DNA序列，通過(guò)NaBH4在電極表面原位還原AgNO3，形成大量的銀納米簇，構(gòu)建具有雙重放大作用的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器。將傳感器進(jìn)行發(fā)光檢測(cè)，發(fā)光信號(hào)與待測(cè)樣品的濃度成線性關(guān)系。本發(fā)明將Ag納米簇信號(hào)探針與DNA雙重放大技術(shù)相結(jié)合，快速、高靈敏檢測(cè)凝血酶，在早期臨床分析檢測(cè)中具有巨大的應(yīng)用潛力。