本發(fā)明提供了一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH的比率型熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。該熒光探針的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：。可通過4?氰基苯硼酸與5?溴水楊醛的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)一步與鄰氨基苯硫酚反應(yīng)獲得。本發(fā)明的熒光探針具有高特異性，在進(jìn)行相應(yīng)pH檢測(cè)過程中不受其他組分的干擾，可用于活細(xì)胞內(nèi)pH的實(shí)時(shí)測(cè)定。該探針的靈敏度高，具有良好的熒光發(fā)射光譜特性（415?700?nm），通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)pH的測(cè)定，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)pH快速準(zhǔn)確檢測(cè)的目的。本發(fā)明提供的熒光探針合成方法，工藝簡單易行，原料廉價(jià)易得，制備成本低，易于推廣。本探針在生物監(jiān)測(cè)領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。