本發(fā)明涉及一種測(cè)定一氧化氮生成的熒光探針及其應(yīng)用。該熒光探針是二價(jià)銅離子Cu2+與有機(jī)配位體2－(2－羥基苯基)苯并咪唑類衍生物形成的銅配合物，具有如下式(I)或(II)的結(jié)構(gòu)。該配合物可簡(jiǎn)單迅速的進(jìn)入活細(xì)胞，進(jìn)而特異性的捕獲細(xì)胞或組織中的活性NO，導(dǎo)致配合物的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，進(jìn)而可以應(yīng)用于化學(xué)體系中NO的檢測(cè)，生物活細(xì)胞或活組織內(nèi)的NO的分析檢測(cè)和熒光成像檢測(cè)，臨床醫(yī)學(xué)上病變組織中NO的檢測(cè)以及生物活體的NO即時(shí)檢測(cè)。本發(fā)明的熒光探針具有極高的NO測(cè)定靈敏度，其最低檢測(cè)下限為17nmol/L，對(duì)NO有很好的選擇性，和NO反應(yīng)前后熒光變化迅速，熒光穩(wěn)定，同時(shí)該探針具有穩(wěn)定性好，能夠長(zhǎng)期保存使用，適用于中性，弱酸性及堿性多種環(huán)境。