本發(fā)明屬于顯微光譜成像技術(shù)領(lǐng)域,涉及一種差動(dòng)共焦拉曼光譜測(cè)試方法。該方法融合差動(dòng)共焦檢測(cè)方法和拉曼光譜檢測(cè)方法技術(shù)特點(diǎn),構(gòu)成一種可實(shí)現(xiàn)樣品微區(qū)光譜檢測(cè)的測(cè)試方法,通過(guò)差動(dòng)共焦技術(shù)精確捕捉激發(fā)光束聚焦焦點(diǎn)位置,探測(cè)對(duì)應(yīng)位置的拉曼光譜,同時(shí)采用設(shè)計(jì)的光瞳濾波器,銳化差動(dòng)共焦拉曼光譜系統(tǒng)的愛里斑主瓣,改善其微區(qū)拉曼光譜探測(cè)能力,精確獲取包括微區(qū)樣品光譜信息和位置信息的微區(qū)空間光譜信息。本發(fā)明顯著提高了共焦拉曼光譜顯微鏡的微區(qū)光譜探測(cè)能力;具有絕對(duì)跟蹤零點(diǎn)和雙極性跟蹤特性,實(shí)現(xiàn)幾何尺度絕對(duì)測(cè)量;可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)、生物物理、生物化學(xué)、材料、工業(yè)精密檢測(cè)等技術(shù)領(lǐng)域,進(jìn)行微區(qū)幾何位置和光譜特性的高精度檢測(cè),具有極其重要的應(yīng)用前景。