本發(fā)明公開了一種近紅外熒光分子免疫層析試紙及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明采用近紅外熒光分子作為標(biāo)記，采用免疫層析技術(shù)，制備近紅外熒光免疫層析試紙，再制得包括樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙的檢測卡，其中硝酸纖維素膜上固定有檢測線和質(zhì)控線。在檢測過程中，采用近紅外光分別掃描質(zhì)控線和樣品線，激發(fā)熒光分子發(fā)光，發(fā)射出的熒光在熒光定量光譜儀中被檢測到，用質(zhì)控線熒光強(qiáng)度校正檢測線熒光強(qiáng)度后代入熒光分析儀中的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可分析檢測標(biāo)本中的待測物濃度。本發(fā)明的試紙可以在生物標(biāo)志物檢測、微生物檢測、食品安全檢測、毒品檢測以及危險(xiǎn)化學(xué)品快速檢測中應(yīng)用，具有靈敏度高、檢測速度快、操作方便的特點(diǎn)。