本發(fā)明涉及熒光檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于內(nèi)過(guò)濾效應(yīng)的比率探針及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。所述比率探針包括n種發(fā)光碳點(diǎn)和m種吸光能量受體；所述n種發(fā)光碳點(diǎn)依次為A₁發(fā)光碳點(diǎn)……A_n發(fā)光碳點(diǎn)，且n≥1；所述n種發(fā)光碳點(diǎn)的形成x種不重合的熒光發(fā)射峰，x≥2，且發(fā)光碳點(diǎn)具有氰反應(yīng)惰性；所述m種吸光能量受體依次為B₁吸光能量受體……B_m吸光能量受體，且m≥1；所述m種吸光能量受體形成y種熒光吸收峰，y種熒光吸收峰與v種熒光發(fā)射峰存在重合，且1≤v≤(x?1)；所述吸光能量受體具有氰反應(yīng)活性。本發(fā)明比率探針通過(guò)多化學(xué)信號(hào)檢測(cè)的方式提高了檢測(cè)精度和靈敏度，并且具有低毒甚至無(wú)毒、檢測(cè)范圍大、構(gòu)建簡(jiǎn)便高效等優(yōu)點(diǎn)。