一種快速比較未純化融合酶及其突變體比活性的方法,(1)用寡聚組氨酸或類似標(biāo)簽融合表達(dá)酶及其突變體,制備誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞裂解液為未純化融合酶樣品;(2)固定化抗標(biāo)簽單抗或其它親和分離介質(zhì);(3)所有測(cè)定中所用固定化親和分離介質(zhì)的結(jié)合容量相同;(4)用來自相同未純化融合酶樣品的不同總蛋白量與固定化親和分離介質(zhì)反應(yīng),分離結(jié)合的融合酶測(cè)定其活性,獲得結(jié)合的融合酶活性對(duì)反應(yīng)體系總蛋白量的響應(yīng)曲線;(5)據(jù)親和反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量學(xué)建立上述響應(yīng)的數(shù)學(xué)模型,用單抗為親和分離介質(zhì)時(shí)所用融合酶遠(yuǎn)多于固定化單抗結(jié)合容量而適用簡(jiǎn)化模型,用Ni2+-NTA需用非簡(jiǎn)化模型,預(yù)測(cè)結(jié)合的融合酶最大活性作為比活性的等效量進(jìn)行比較。
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