本發(fā)明涉及一種大規(guī)模提取去除內(nèi)毒素的質(zhì)粒的方法，包括先通過(guò)經(jīng)典堿裂解法獲得粗分離的質(zhì)粒DNA，然后依次加入異丙醇、NH4Ac溶液、RNase?A、NaCl，再加入PEG6000和NaCl的混合溶液，期間使用TE溶液溶解沉淀，通過(guò)無(wú)水乙醇重新沉淀，通過(guò)70%乙醇洗滌沉淀并配合離心操作，干燥后最終用TE溶液溶解沉淀，獲得目的質(zhì)粒。本發(fā)明能很好的去除內(nèi)毒素對(duì)質(zhì)粒DNA的污染，本發(fā)明所使用的所有試劑均為實(shí)驗(yàn)室常備的化學(xué)試劑，操作方法簡(jiǎn)潔，易于掌控，適合大規(guī)模質(zhì)粒的提取。本發(fā)明所獲得的質(zhì)粒濃度可達(dá)5mg/mL，且內(nèi)毒素低于5EU/μg，質(zhì)粒可用于酶切、DNA序列的測(cè)序、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、病毒包裝以及臨床動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。