本發(fā)明公開了一種三元穿梭載體pTY,其序列如SEQ?ID?NO:11所示。還公開了一種利用pTY構(gòu)建柑桔黃化脈明病毒(CYVCV)侵染性克隆的方法,包括如下步驟:(1)制備CYVCV全長cDNA;(2)采用限制性內(nèi)切酶Stu?I、Sma?I酶切如SEQ?ID?NO:11所示三元穿梭載體pTY,得到pTY線性化的載體;(3)酵母轉(zhuǎn)化伴隨的同源重組:采用醋酸鋰法將線性化載體pTY與CYVCV全長cDNA共轉(zhuǎn)化酵母菌YPH501;(4)侵染性克隆鑒定:同源重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌C58C1,篩選獲得CYVCV侵染性克隆。本發(fā)明有效克服了病毒全長cDNA片段在大腸桿菌中產(chǎn)生毒性或不穩(wěn)定導(dǎo)致克隆失敗的現(xiàn)象。
聲明:
“三元穿梭載體及利用其構(gòu)建CYVCV侵染性克隆的方法” 該技術(shù)專利(論文)所有權(quán)利歸屬于技術(shù)(論文)所有人。僅供學(xué)習(xí)研究,如用于商業(yè)用途,請聯(lián)系該技術(shù)所有人。
我是此專利(論文)的發(fā)明人(作者)