本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，包括發(fā)光杯、化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B、與所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B相配合檢測(cè)的酶溶液、感光設(shè)備；所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B與所述酶溶液發(fā)光體系的建立，根據(jù)所述建立的發(fā)光體系檢測(cè)所述酶溶液活性或者所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物的性能。本發(fā)明的方法可以快速有效地準(zhǔn)確測(cè)定多種能引起化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象的酶的活性及濃度，且能夠根據(jù)已知濃度的酶溶液快速準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)化學(xué)發(fā)光底物的性能，特別是適用于兩種化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行比較。