本發(fā)明公開了一種基于化學(xué)衍生化與HPLC?MS的不飽和脂肪酸定量方法1)以直接質(zhì)譜分析確定脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化錐電壓和碰撞能量電壓；2)以不飽和脂肪酸A作為內(nèi)標(biāo)，將內(nèi)標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)品脂肪酸進(jìn)行碳碳雙鍵環(huán)氧化，并通過HPLC?ESI?MS方法進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)品脂肪酸與內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)將待測(cè)脂肪酸進(jìn)行碳碳雙鍵環(huán)氧化；4)將環(huán)氧化的待測(cè)脂肪酸以內(nèi)標(biāo)法，通過HPLC?ESI?MS方法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)待測(cè)脂肪酸的含量，并在步驟1)所得的標(biāo)準(zhǔn)曲線上進(jìn)行回歸，得到待測(cè)脂肪酸的含量。本發(fā)明對(duì)脂肪酸的異構(gòu)體進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)，并且簡(jiǎn)化了定量的流程，提高了定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性。