本發(fā)明公開了一種干血斑中甲狀腺素和三碘甲狀腺素的檢測(cè)方法，屬于生物化學(xué)分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域；本發(fā)明的一種干血斑中甲狀腺素和三碘甲狀腺素的檢測(cè)方法包括以下步驟：(1)往干血斑樣品中加入內(nèi)標(biāo)萃取液混合震蕩、離心過濾、氮吹、復(fù)溶，得待測(cè)樣品；(2)采用液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明提供的檢測(cè)方法能同時(shí)檢測(cè)干血斑中T3和T4的濃度水平，且具備靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，不受異常結(jié)合蛋白、藥物等影響的特點(diǎn)，準(zhǔn)確度高；同時(shí)以干血斑作為檢測(cè)基礎(chǔ)物質(zhì)，從而能夠方便新生兒標(biāo)本采集、運(yùn)輸、檢測(cè)和保存，適合大批量篩查；并且提供的干血斑標(biāo)本前處理操作簡(jiǎn)單，測(cè)定時(shí)間短，可顯著的提高檢測(cè)效率。