本發(fā)明涉及免疫化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種血清中可交換銅和銅藍(lán)蛋白一步同時(shí)檢測用試劑盒、制備方法及應(yīng)用。該試劑盒包括銅藍(lán)蛋白和銅離子抗原修飾的免疫載體、量子點(diǎn)標(biāo)記的銅藍(lán)蛋白抗體、量子點(diǎn)標(biāo)記的抗Cu?EDTA抗體。免疫載體具有熒光淬滅特性，免疫載體上的銅藍(lán)蛋白和銅離子抗原與樣品中的銅藍(lán)蛋白和形成的EDTA?Cu競爭結(jié)合量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體；一定數(shù)量量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體與樣品中的交換銅和銅藍(lán)蛋白結(jié)合，使免疫載體捕獲的量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體減少，量子點(diǎn)淬滅程度降低。量子點(diǎn)標(biāo)記抗體熒光強(qiáng)度與樣品中目標(biāo)物濃度呈正相關(guān)，實(shí)現(xiàn)一步檢測血清中的可交換銅和銅藍(lán)蛋白。與傳統(tǒng)夾心免疫熒光法相比，該試劑盒省去了目標(biāo)捕獲步驟，顯著縮短檢測時(shí)間。