本發(fā)明涉及檢測生物材料中的一個或多個DNA端部的方法,所述方法包括以下步驟I?III和所述步驟I?III中的每一者的子步驟a?h中的至少一者:I.制備所述材料,包括a.將所述生物材料固定和/或透化和/或裂解和/或分離和/或分級和/或固定化,b.提高一個或多個DNA端部的可及性,c.封閉所述生物材料中2?6型分子的一個或多個非特異性結(jié)合位點(diǎn),II.處理一個或多個DNA端部,包括d.通過以下方式對一個或多個DNA端部進(jìn)行修飾,進(jìn)行化學(xué)或物理處理,隨后藉由催化手段或非催化手段使1型分子與所述一個或多個DNA端部結(jié)合;封閉所述生物材料中2?6型分子的一個或多個非特異性結(jié)合位點(diǎn);III.識別和檢測所述一個或多個經(jīng)修飾的DNA端部:將來自步驟II的所述生物材料與至少兩種分子:2型分子和3型分子一起孵育,所述至少兩種分子以允許導(dǎo)致滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)反應(yīng)的步驟的方式與所述1型分子結(jié)合,g.通過以下方式檢測一個或多個DNA端部:i.任選地使合適的4型和/或5型分子與所述2型和3型分子接觸,其中所述4型和/或5型分子與所述1型寡核苷酸綴合,ii.加入2型寡核苷酸和連接酶,以允許所述加入的2型寡核苷酸與已經(jīng)與所述4型和/或5型分子連接的所述1型寡核苷酸雜交,或如果所述2型和3型分子與所述1型寡核苷酸連接的話,則與所述2型和3型分子雜交,以及然后執(zhí)行所述2型寡核苷酸的DNA連接,iii.通過以下方式來執(zhí)行擴(kuò)增:加入聚合酶和核苷酸溶液以允許進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增(RCA)反應(yīng),以及加入6型分子以允許所述6型分子與由此獲得的RCA反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行后續(xù)雜交,h.檢測所述6型分子;其中當(dāng)執(zhí)行步驟I的多于一個子步驟a?c時,它們可以以任何次序發(fā)生。本發(fā)明還涉及滾環(huán)復(fù)制用于標(biāo)識單個DNA端部的存在和位置的用途,以及上述方法用于檢測生物材料中的一個或多個DNA端部的用途。
聲明:
“檢測一個或多個DNA端部的方法及其用途” 該技術(shù)專利(論文)所有權(quán)利歸屬于技術(shù)(論文)所有人。僅供學(xué)習(xí)研究,如用于商業(yè)用途,請聯(lián)系該技術(shù)所有人。
我是此專利(論文)的發(fā)明人(作者)