本發(fā)明公開了一種細(xì)胞內(nèi)新的生物合成路徑探測(cè)方法，所述方法包括：S1、制備樣本切片并在所述樣本切片中注入同位素溶液，生成目標(biāo)樣本切片；S2、對(duì)所述目標(biāo)樣本切片進(jìn)行MS檢測(cè)，得到所述樣本切片的中化學(xué)物質(zhì)的代謝路徑，其中，S2包括如下步驟：S21、對(duì)所述目標(biāo)樣本切片進(jìn)行MS檢測(cè)，得到所述目標(biāo)樣本切片對(duì)應(yīng)的MS數(shù)據(jù)并對(duì)所述MS數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；S22、根據(jù)所述MS數(shù)據(jù)的分析結(jié)果，得到所述樣本切片的中化學(xué)物質(zhì)的代謝路徑；本發(fā)明能夠?qū)?biāo)記同位素的代謝物離子強(qiáng)度值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，避免不同樣本之間可比性差，保證有效的同位素跟蹤，以得到完整的化學(xué)物質(zhì)的合成路徑。