一種測定反硝化聯(lián)合厭氧甲烷氧化速率的方法。該發(fā)明屬于環(huán)境研究領(lǐng)域，公開了一種運(yùn)用同位素示蹤技術(shù)測定土壤、沉積物或活性污泥的反硝化聯(lián)合厭氧甲烷氧化速率的方法和裝置，該發(fā)明包括樣品混合和分裝裝置、厭氧環(huán)境創(chuàng)造裝置及方法、樣品測定前的預(yù)處理方法和樣品測定、計(jì)算方法。在高純氦氣保護(hù)條件下混勻、分裝樣品，再利用高純氦氣吹脫混合物創(chuàng)造厭氧環(huán)境。經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)消耗反應(yīng)體系中殘留的NO2-、NO3-和O2后向反應(yīng)物中投加電子受體和標(biāo)記底物13C-CH4，通過測定不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)反應(yīng)生成的45CO2的含量，計(jì)算反硝化聯(lián)合厭氧甲烷氧化速率。該方法設(shè)備簡單，操作方便，不需要在厭氧箱中操作即可創(chuàng)造嚴(yán)格的厭氧環(huán)境。用同位素標(biāo)記反應(yīng)底物，測定標(biāo)記的產(chǎn)物計(jì)算反硝化聯(lián)合厭氧甲烷氧化速率，不受其他物理、化學(xué)變化干擾。