本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)快速構(gòu)建方法及其應(yīng)用。相比于現(xiàn)有報(bào)道，本發(fā)明是專門針對(duì)100～300bp中小長(zhǎng)度的RNA的高效文庫(kù)構(gòu)建方法，合成cDNA前無(wú)需任何酶反應(yīng)和化學(xué)反應(yīng)處理，不會(huì)導(dǎo)致處理過(guò)程中RNA的降解和損耗；實(shí)驗(yàn)過(guò)程快速、簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程沒(méi)有對(duì)RNA和中間產(chǎn)物的復(fù)雜處理，特別適用于起始樣本量少的情況，實(shí)現(xiàn)高效的連接，最終得到濃度足夠高的轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)，完成上機(jī)測(cè)序和后續(xù)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序相關(guān)的應(yīng)用，有效實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞、外泌體或珍貴臨床樣本的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在基礎(chǔ)研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等鄰域的廣泛應(yīng)用。