本發(fā)明公開了一種Nanos2啟動(dòng)子核心區(qū)域關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的驗(yàn)證方法：首先，對(duì)Nanos2?5’側(cè)翼區(qū)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，構(gòu)建真核表達(dá)載體pNanos2?EGFP，將pNanos2?EGFP、pEGFP?N1、pLinker?EGFP分別轉(zhuǎn)染DF?1細(xì)胞，以對(duì)Nanos2啟動(dòng)子區(qū)定性分析；分別構(gòu)建啟動(dòng)子5’端不同長(zhǎng)度缺失載體pGL3?1187、pGL3?959、pGL3?788、pGL3?493、pGL3?155與pRL?SV40共轉(zhuǎn)染DF?1細(xì)胞，進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)以對(duì)Nanos2啟動(dòng)子核心區(qū)域進(jìn)行鑒定，構(gòu)建缺失核心區(qū)域載體，再次進(jìn)行雙熒光素酶活性分析，觀察是否缺失核心區(qū)域后啟動(dòng)子活性喪失或顯著降低；對(duì)Nanos2啟動(dòng)子核心區(qū)域進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)，進(jìn)行雙熒光素酶報(bào)告分析和CHIP試驗(yàn)確定關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、qRT?PCR、細(xì)胞免疫化學(xué)、流式細(xì)胞分析等方法檢測(cè)雄性生殖細(xì)胞分化情況。