本發(fā)明提出了一種快速高通量的基因定點誘變方法,其步驟為:1.構(gòu)建了一個表達DPNI限制性內(nèi)切酶的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的用于定點誘變的菌株;2.根據(jù)需要對基因待突變的位置進行序列分析,設(shè)計部分重疊(10~16NT)的PCR誘變引物;3.反向PCR擴增;4.擴增后的PCR產(chǎn)物直接化學法轉(zhuǎn)化上述構(gòu)建的表達DPNI的DNA腺嘌呤甲基化酶缺陷的菌株,這樣經(jīng)過DPNI體內(nèi)篩選就可以得到攜有預(yù)定突變的質(zhì)粒。本發(fā)明能夠真正做到簡單快速的定點誘變,且不需訂購特殊修飾的引物,不需要對PCR后的產(chǎn)物進行任何處理步驟(酶切連接,體外雜交,膠回收和體外DPNI的消化處理等)就能方便迅速地構(gòu)建突變質(zhì)粒。
聲明:
“快速高通量的基因定點誘變方法” 該技術(shù)專利(論文)所有權(quán)利歸屬于技術(shù)(論文)所有人。僅供學習研究,如用于商業(yè)用途,請聯(lián)系該技術(shù)所有人。
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