本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定同位素標(biāo)記堿性橙II的合成方法，以穩(wěn)定同位素標(biāo)記苯為原料，經(jīng)硝化反應(yīng)生成穩(wěn)定同位素標(biāo)記硝基苯，再和還原劑反應(yīng)，得到穩(wěn)定同位素標(biāo)記苯胺，最后經(jīng)重氮化與間苯二胺耦合轉(zhuǎn)位后得到穩(wěn)定同位素標(biāo)記堿性橙II。本發(fā)明制備的穩(wěn)定同位素標(biāo)記堿性橙II經(jīng)分離提純后，化學(xué)純度達(dá)98％以上，同位素豐度在98％以上，可充分滿足食品安全領(lǐng)域違禁染料檢測(cè)的需求。