本發(fā)明涉及一種2?甲基檸檬酸高產(chǎn)基因工程菌及其構(gòu)建方法,屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的2?甲基檸檬酸高產(chǎn)基因工程菌是由蘇云金芽胞桿菌BMB171基因組中敲除2?甲基檸檬酸脫水酶基因prpD而得到的。本發(fā)明還提供了上述2?甲基檸檬酸高產(chǎn)基因工程菌的構(gòu)建方法,以蘇云金芽胞桿菌BMB171為出發(fā)菌株,利用基于歸巢內(nèi)切酶I?SceI誘發(fā)染色體同源重組機(jī)制的基因敲除體系成功獲得2?甲基檸檬酸脫水酶(PrpD)基因無(wú)痕缺失突變株ΔprpD。通過(guò)液相色譜和質(zhì)譜的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與出發(fā)菌株BMB171相比,ΔprpD菌株胞內(nèi)2?甲基檸檬酸濃度提高了217倍,且與化學(xué)法合成的2?甲基檸檬酸相比,本發(fā)明法所產(chǎn)生的2?甲基檸檬酸空間構(gòu)型專(zhuān)一。
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