利用玉米秸稈半連續(xù)生產(chǎn)氫氣和油脂的方法，本發(fā)明涉及生物化工技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明要解決現(xiàn)有玉米秸稈能量轉(zhuǎn)化率低的技術(shù)問題。方法：玉米秸稈預(yù)處理，得到秸稈混合液；制備產(chǎn)氫菌種子液；向秸稈混合液接入產(chǎn)氫菌種子液，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，產(chǎn)生氫氣和發(fā)酵液；重復(fù)發(fā)酵；去除發(fā)酵液中的固體；接入微藻種子液，進(jìn)行微藻發(fā)酵，合成油脂；重復(fù)發(fā)酵；采收微藻發(fā)酵液中的微藻生物質(zhì)，提取油脂。本發(fā)明方法的氫氣產(chǎn)量為811.1mL H₂/L工作體積，油脂產(chǎn)量為588.5mg/L工作體積，玉米秸稈的能量轉(zhuǎn)化率提高了103.7％。本發(fā)明方法用于生產(chǎn)氫氣和油脂，實(shí)現(xiàn)清潔生物能源開發(fā)和廢棄物處理的有效結(jié)合。