本發(fā)明提供了一種基于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的甲基化酶檢測探針、檢測試劑盒以及檢測方法。本發(fā)明提供的基于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的甲基化酶檢測探針不需要任何的標(biāo)記和修飾，設(shè)計(jì)簡單。而且本發(fā)明將甲基化酶和特定的依賴甲基化的內(nèi)切酶的作為組合使用，只有兩者的相互作用才能將發(fā)卡結(jié)構(gòu)的檢測探針切開，產(chǎn)生引物信號(hào)，從而產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)；而任何其他甲基化酶作用發(fā)卡結(jié)構(gòu)后都不能被該組合之外的內(nèi)切酶識(shí)別，不能產(chǎn)生引物信號(hào)，從而沒有化學(xué)發(fā)光信號(hào)，使本發(fā)明的特異性非常高。此外，本發(fā)明的技術(shù)方案將連接酶催化效率高與化學(xué)發(fā)光信號(hào)顯著增強(qiáng)的兩種優(yōu)勢串聯(lián)起來，極大地提高了檢測靈敏度。本發(fā)明在疾病早期診斷和藥物篩選方面具有廣闊的應(yīng)用價(jià)值。