本發(fā)明提供了一種基于多腺嘌呤的倒置莖環(huán)比率型電化學(xué)DNA生物傳感器及其應(yīng)用，所述電化學(xué)DNA生物傳感器包括多腺嘌呤倒置莖環(huán)探針、亞甲基藍(lán)修飾的信號(hào)探針、二茂鐵修飾的內(nèi)標(biāo)探針和金電極，所述多腺嘌呤倒置莖環(huán)探針為三嵌段倒置莖環(huán)結(jié)構(gòu)。所述多腺嘌呤倒置莖環(huán)探針的骨架結(jié)構(gòu)從5’?3’依次為：第三結(jié)合區(qū)域?第一結(jié)合區(qū)域?第二結(jié)合區(qū)域，所述第二結(jié)合區(qū)域和第三結(jié)合區(qū)域雜交互補(bǔ)配對(duì)形成倒置莖環(huán)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明中所述電化學(xué)DNA生物傳感器采用亞甲基藍(lán)和二茂鐵的峰電流的比值作為信號(hào)輸出，可以有效排除檢測(cè)過(guò)程中微環(huán)境的變化、電極有效面積不同、組裝捕獲探針密度不同等因素的影響，檢測(cè)性能優(yōu)越，具有廣闊的應(yīng)用前景。