本發(fā)明涉及動物病疫檢測領域，具體涉及一種鑒別豬偽狂犬病毒基因缺失疫苗株和野毒株的熒光定量PCR檢測試劑盒。在本發(fā)明提供的檢測試劑盒中，用于檢測豬偽狂犬病毒gI/gE基因缺失情況的引物及探針如SEQ ID NO.1?3所示。本發(fā)明提供的檢測試劑盒中還包括，基于化學法修飾的熱啟動DNA聚合酶、dUTP/UNG防污染系統(tǒng)、抗PCR抑制物因子。本發(fā)明提供的檢測試劑盒敏感性高，最低檢測限為189copies/uL。本發(fā)明所述試劑盒適用于復雜的動物臨床樣本的檢測。