本發(fā)明公開了一種抗Dig的抗體及其在測序中的應(yīng)用，本發(fā)明的抗體包括選自SEQ ID NO:1?4的重鏈可變區(qū)氨基酸序列和選自SEQ ID NO:9?12的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列。本發(fā)明的單克隆抗體能夠特異性識別Dig抗原，將其與多個(gè)熒光素酶Nluc經(jīng)化學(xué)偶聯(lián)制備的Nluc?Ab?Dig能夠特異性識別Dig?dNTP上的Dig分子，當(dāng)加入Nluc底物后，通過捕獲Nluc的熒光信號來完成測序。本發(fā)明的單克隆抗體能夠用作測序儀的重要測序酶原材料。本發(fā)明首次采用熒光素酶Nluc化學(xué)偶聯(lián)標(biāo)記Anti?Dig，可提高測序結(jié)果的特異性和靈敏度，并首次將其用于測序儀的測序試劑盒。