本發(fā)明公開(kāi)了一種用于篩選治療器官纖維化的膠原轉(zhuǎn)錄抑制劑的高通量篩選方法,其特征在于,包括以下步驟:克隆人Col1A1、Col1A2、Col3A1啟動(dòng)子?2000?100區(qū)域,單獨(dú)或聯(lián)合插入pGL3?basic報(bào)告基因載體,經(jīng)轉(zhuǎn)化DH5α菌和質(zhì)粒提取得到用于轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒;將得到的質(zhì)粒分別與內(nèi)參pRL?TK質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞,后加入TGF?β1激活;或同時(shí)加入TGFβR抑制劑;激活后按照熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒進(jìn)行處理,酶標(biāo)儀讀取化學(xué)發(fā)光數(shù)據(jù),得出對(duì)TGF?β1誘導(dǎo)的膠原合成敏感的質(zhì)粒,以上結(jié)果證實(shí)了該種篩選方法的實(shí)用性。還公開(kāi)了利用該方法在測(cè)定抑制I/III型膠原轉(zhuǎn)錄藥物的藥效定量分析中的應(yīng)用。
聲明:
“用于篩選治療器官纖維化的膠原轉(zhuǎn)錄抑制劑的高通量篩選方法” 該技術(shù)專(zhuān)利(論文)所有權(quán)利歸屬于技術(shù)(論文)所有人。僅供學(xué)習(xí)研究,如用于商業(yè)用途,請(qǐng)聯(lián)系該技術(shù)所有人。
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