一種3-羥基丙酸高產(chǎn)菌重組質(zhì)粒的構(gòu)建方法屬于生物化工生產(chǎn)領域。鑒于現(xiàn)有產(chǎn)3-羥基丙酸工程菌產(chǎn)量大都較低,發(fā)現(xiàn)了適用于肺炎克雷伯氏桿菌的高效tac啟動子以及能轉(zhuǎn)化3-羥基丙醛為3-羥基丙酸的puuc醛脫氫酶,并以此構(gòu)建重組工程菌。將該酶編碼基因的序列進行分析后,對該基因進行了化學合成。測序驗證后將該啟動子和酶在肺炎克雷伯氏桿菌中超表達,獲得了重組肺炎克雷伯氏桿菌pET(ptac-puuc),測定其體內(nèi)及體外對3-羥基丙醛的催化能力。在體外,該酶對3-羥基丙醛的酶活達到26.31U/mg,是原代肺炎克雷伯氏桿菌(3.82U/mg)的6.9倍。在5L發(fā)酵罐中培養(yǎng)改造后的工程菌,經(jīng)培養(yǎng)基成分、IPTG濃度條件優(yōu)化后,其48h后3-羥基丙酸產(chǎn)量高達73g/L。
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