本發(fā)明公開了一種新的TGF?β信號通路在如皋黃雞雄性生殖細(xì)胞分化過程中功能驗證方法：首先基于RNA?seq數(shù)據(jù)源進(jìn)行關(guān)鍵信號通路富集并篩選；利用TGFβ受體抑制劑 : LY2109762，BMP4受體抑制劑 : LDN193189在體內(nèi)和體外兩個水平對TGF?β信號通路進(jìn)行抑制以驗證該通路在雞雄性生殖細(xì)胞分化過程中的具體功能；設(shè)計LY2109762+BMP4，LDN193189+BMP4以及Double+BMP4實驗組進(jìn)行實驗，實驗過程中每個1d，取樣一次。檢測Smad2，Smad5的表達(dá)變化以及生殖標(biāo)記基因的表達(dá)變化，利用間接免疫熒光和FACS檢測各分組中細(xì)胞誘導(dǎo)后interginα6+interginβ1+細(xì)胞數(shù)量；采用雞胚注射方式將抑制劑注射雞胚，設(shè)計實驗組：Y2109762，LDN193189以及Double組，孵化過程中于4d和18d取樣，檢測Smad2，Smad5的表達(dá)變化以及生殖標(biāo)記基因的表達(dá)變化，利用組織免疫化學(xué)和FACS檢測各分組中18d后睪丸中interginα6+interginβ1+細(xì)胞數(shù)量。