本發(fā)明公開了一種生物電催化系統(tǒng)促進(jìn)P450催化甾體羥基化反應(yīng)的方法，包括下列步驟：（一）DNA合成及重組菌構(gòu)建；（二）生物電催化系統(tǒng)電池裝置的預(yù)處理；（三）P450酶生物電催化系統(tǒng)的組裝；（四）樣品的提取、處理及檢測(cè)方法；（五）生物量的測(cè)定；（六）胞內(nèi)NAD(H/+)、NADP(H/+)比值測(cè)定。本發(fā)明向P450酶全細(xì)胞催化系統(tǒng)中引入體外電子傳遞途徑（EET途徑）驅(qū)動(dòng)NAD(P)H再生，結(jié)合了電化學(xué)和P450酶全細(xì)胞催化系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了碳源電子供體和電極電子供體對(duì)P450介導(dǎo)的單加氧反應(yīng)的協(xié)同驅(qū)動(dòng)作用，即為細(xì)胞色素P450酶生物電催化系統(tǒng)。本發(fā)明以CYP7B1的全細(xì)胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)為基礎(chǔ)，DHEA（I）、7α?OH?DHEA（II）分別為該羥化反應(yīng)的底物和產(chǎn)物，為P450介導(dǎo)的單加氧反應(yīng)在甾體工業(yè)上的發(fā)展提供良好的借鑒。